Nippon Genetics Bambanker Direct 無血清無需離心細胞凍存液

• 可在-80°C或-196°C的溫度下長期凍存細胞

• 非常適合雜交瘤細胞和高通量（HTP）應用

• Bambanker Direct可以直接加到細胞中--無需洗滌且無需離心

• 細胞復蘇后的活率高

• 即用型冷凍介質–無需程序或順序降溫冷凍

• 無血清–無污染風險

• 保質期長

天生為了雜交瘤（Born for hybridomas）

某些細胞類型（例如雜交瘤）對過度處理和操縱表現出更高的敏感性。 在長期儲存和凍融循環后，這些細胞通常表現出更高的死亡率或不想要的分化。 Bambanker Direct正是針對這些類型的細胞而開發的，以提供嚴格的環境控制。 通過取消離心步驟，現在可以在添加新型冷凍保護劑Bambanker Direct后立即冷凍細胞以長期保存。 只需將Bambanker Direct一對一地添加到培養板孔中，然后直接放入冰箱即可。 與原始Bambanker一樣，Direct版本也沒有血清，因此對于動物來源的血清可能是一個問題的細胞來說非常有用。 通過使用Bambanker Direct，雜交瘤細胞可在-80°C長期保存后復蘇率高達100％。

血清增加了長期儲存的差異（Serum adds variation to long-term storage）

所有BambankerTM產品均不含血清。含有血清的冷凍保存培養基具有回收率波動和成分不確定的缺點。凍存于含血清的培養基中的細胞的實驗可重復性可能會受到批次之間血清差異的影響，因為蛋白質和其他生物分子的組成和濃度會隨每批血清而變化。解凍和使用這種含血清培養基的細胞時，可能會導致問題。因為BambankerTM的每種成分都經過精確定義，因此您可以放心，在不同時間存儲的細胞都將有一致的效率。

BambankerTM可防止不期望的分化（BambankerTM prevents undesired differentiation）

不期望的細胞分化也可能是冷凍細胞長期保存的一個問題。 所有Bambanker試劑均旨在大程度地減少此問題。 對于特別麻煩的細胞，Bambanker不含DMSO的配方經過特殊配制，可防止可能與含DMSO的冷凍保存試劑相關的問題。 因此，請加入越來越多的實驗室的選擇，使用Bambanker保護其細胞系！

多能干細胞的細胞活力和ALP染色 

                    上排：解凍兩天后檢測到大量細胞。 解凍后細胞沒有形態變化 

                    下排：BambankerTM不會引起細胞分化，因為所有凍結的干細胞仍會產生高水平的堿性磷酸酶，這是多能干細胞的報告基因

細胞凍存液家族（Family of BambankerTM）

Bambanker 細胞凍存液-細胞凍存、解凍操作步驟

?凍存操作步驟：慢凍

①從細胞培養箱中取出培養中處于對數增殖期的細胞。※凍存對數增殖期的細胞，是可以確保細胞良好生存率中最重要的一點。 

②使用部分細胞用臺盼藍染色（檢測活率）并計數細胞數量。 

③將含細胞的培養基移至離心管中，在合適條件（低離心力，必要低溫）下進行離心。 

④去除上清液后，將細胞沉淀通過輕柔旋渦操作進行懸浮。 

⑤每個凍存管中細胞數要保持規定濃度，然后再添加凍存液。 （每 1mLBambanker凍存液可凍存 5×105～1×107 個細胞）※⑤之后的操作步驟盡可能快速完成。另外，Bambanker凍存液從冷藏柜取出后，直接使用，無須平衡室溫，盡快進行保存處理 。

⑥無需預冷細胞懸浮液，直接置于-80℃下保存。 

⑦保存液氮時，先在-80℃保存 12 小時（超過一晚），待狀態穩定后在移至液氮中保存。※轉移細胞時請盡快完成操作。 

?解凍操作步驟：快融 

①在 37℃恒溫箱（或者37℃水浴鍋）等設備中解凍細胞，確認凍存管中液體融解。※此操作需迅速進行。因為細胞在解凍過程過極易受到損壞。

②將溶解的細胞液轉移到含有培養基的15ml無菌離心管中，混合后在規定條件下進行離心 （比如：300～400×g） 

③去除上清液后，加入少量培養基，將細胞沉淀通過輕柔旋渦操作進行懸浮。 

④混勻后，取出其中一部分細胞用臺盼藍染色（檢測活率）并計數細胞數量。

⑤將混勻的細胞懸液轉移至培養容器中，細胞培養箱內靜置培養。

常見問題（FAQ）

Q1. Bambanker凍存液可以使用的最小體積是多少？

對于1*106個細胞，建議使用1 mL，對于較少的細胞，您可以減少Bambanker的用量。 例如，對于5×105，請使用0.5 mL。

Q2. Bambanker凍存液是否包含DMSO？

除Bambanker DMSO-Free（BBF01）外，Bambanker的其他三種均包含DMSO。

Q3. 復蘇培養時，我們可以在不進行細胞洗滌的情況下直接在培養基中使用解凍的細胞嗎？

 是的，您不需要清洗步驟。

Q4. 可以將在Bambanker中冷凍的細胞用于提取RNA嗎？

可以。 但是請注意，每個試管中的細胞數少（1*106個細胞）可能會導致分離出的RNA少。

Q5. 我們可以使用Bambanker進行PBMC的冷凍保存嗎？

可以，

PBMC凍存的一個案例：

實驗方案：

i）從健康人的血液中分離出PBMC

ii）PBMC在Bambanker（標準版）中冷凍，并在-80°C和-196°C（液氮）中以1×10 ^ 6細胞/個保存12個月。 1mL Bambanker 1mL等分試樣

iii）冷凍后十二個月，快速融化細胞并測量細胞數，然后使用包被抗CD3抗體的T-25培養瓶和含IL-2（700 U / mL）的培養基培養7天。在第5、6和7天測量細胞計數，并在培養的第7天進行流式細胞術。

實驗結果：

在-80°C下保存12個月，回收率59.5％；存活率88.9％

儲存在液氮中（-196°C）保存12個月，回收率63.9％；存活率87.3％

回收率=解凍后完整細胞數/最初凍存的細胞數；存活率=在設定的檢測時間點，通過臺盼藍測定的活細胞在總細胞中所占的百分比。

Q6. 您建議如何處理特別脆弱/敏感的細胞？

冷凍技巧：冷凍敏感細胞的最佳方法是將細胞放入Bambanker（選擇合適的類型）中，并在處理過程中將其保持在4°C。將它們盡可能快地放入-80°C的冰箱中24h。然后，將細胞儲存在-80°C或將冷凍的細胞轉移至液氮中。

解凍技巧：將小瓶放入37°C水浴中，直到內容物融化為止。然后應立即將細胞轉移至大量預熱的培養基中-對于最敏感的細胞類型（干細胞，原代細胞），逐滴添加以保持活力。盡管某些細胞可以通過離心沉淀，然后再用移液器輕輕重懸，然后添加到裝有預熱生長培養基的細胞培養瓶中，但對于大多數敏感細胞類型，將它們融化后直接移入培養瓶中的操作更為溫和。第二天進行培養基更換，以除去任何殘留的防凍劑。

Q7. 我們可以使用Bambanker冷凍保存整個類器官嗎？

是的，Bambanker和Bambanker HRM是您的選擇。 兩者均可提供超過70％的恢復率。 我們建議每個冷凍管使用少量類器官（低于20 mg）。 我們還建議您先將類器官在4°C的Bambanker中浸泡10分鐘，然后再冷凍。 將正常Bambanker用于類器官，將Bambanker HRM用于人類臨床試驗或人類組織衍生的類器官。

Q8. Bambanker可以用于果蠅嗎？

只要是凍存單個細胞，就沒有問題。 我們沒有凍存整個生物體的經驗。

Q9.我可以使用Bambanker凍存受感染細胞中的病毒嗎？

只要細胞保持健康，這沒問題。

Q10. 我可以直接使用Bambaker而不用將其恢復室溫（RT）嗎？

沒問題，可以直接使用。

Q11. 如何使用Bambanker提高類器官的生存率？ 我們使用20毫克的胃和結腸組織。

您可以將正常Bambanker用于動物組織。 另外，我們建議將組織細化到20毫克以下。 您也可以在冷凍之前將組織在4°C的Bambanker中浸泡10分鐘。

Q12. 為什么我使用了Bambanker來保存細胞，但是存活率依然不高？

請凍存前確保細胞處于生長對數期，并且凍存時細胞數目控制在5×105~1×107/mL凍存液。

Q13. 我們實驗室已經有固定的凍存程序了，如果換了你們的Bambanker，可以還繼續用原來程序降溫的方法凍存嗎？

雖然本產品可以無需程序降溫凍存細胞，但如果通過程序降溫盒等適當控制了溫度下降的速度，效果更佳（如虎添翼）。

Q14. 哪些細胞株（系）適合使用Bambanker來進行細胞冷凍保存？

幾乎所有細胞株（系）都可以使用Bambanker進行凍存。對于較為寶貴的ES/iPS細胞的保存尤其適用。上所列舉的細胞系均已經過測試驗證。

但也并不排除可能有某些細胞株是不適合使用Bambanker來進行凍存的，用戶在沒有確認是否可使用時，建議在進行正式細胞凍存之前先進行預實驗。

Q15. 無血清凍存液相比傳統含血清凍存液有什么優勢？

無血清凍存液因不含有動物血清，質量更穩定，批間差更小；同時未知生物成分或感染性物質污染細胞的幾率也極低，尤其對于ES/iPS細胞等有可能用于再生醫療的細胞安全得以嚴格保障；可以直接凍存無血清培養的細胞，免去無血清再馴化的步驟；另外Bambanker無血清細胞凍存液不需要像傳統的血清凍存液那樣需要程序降溫，減少了用戶的繁瑣操作，節省了時間。

Q16. Bambanker在冷凍保存細胞的過程中起什么作用？

無血清細胞凍存液使用了DMSO（DMSO-Free除外）等作為保護劑，在凍存細胞時能以1℃/min左右的溫度下降而逐漸凍存，在此過程中，細胞內的水分子被置換成保護劑，抑制胞內和細胞周邊的冰晶的形成，防止細胞膜和細胞器結構損傷，防止蛋白變性。